另辟蹊径：昂丹司琼的有关物质测定一定要用氰基柱吗？

昂丹司琼（Ondansetron）是一种强效、高选择性的5-HT₃受体拮抗剂，具有强止吐作用，可以用于缓解细胞毒性药物化疗和放射治疗的恶心呕吐，也可预防和治疗手术后的恶心呕吐。在我们检索到的各药典（ChP，USP，EP）最新收录的有关物质检测方法都是使用氰基柱，在反相体系（磷酸盐溶液-乙腈）下检测。

图1 昂丹司琼的结构式

其中需要关注的有关杂质如图2所示：

图2 昂丹司琼各杂质的结构式

使用氰基柱可以增强杂质E和F的保留，但是氰基柱在高水相条件下柱流失明显，从而影响色谱柱的稳定性和方法的重现性，给日常检测带来风险。我们考虑是否可以使用更稳定的色谱柱固定相，比如C18类色谱柱来开发新的方法。其中遇到的第一个挑战是杂质E和F的保留，第二个问题是杂质的分离。

我们首先来应对第一个挑战：杂质E和杂质F的保留。从它们的结构来分析，都是碱性的小分子，因此我们有三种策略来增强其保留：

1. 使用碱性条件，抑制杂质E和F的电离，从而增强其疏水保留（但是需要选择更耐碱的色谱柱，推荐Artchrom WP C18）：

我们尝试使用0.1%的氨水作为水相，选用具有更强碱性条件耐受的Artchrom WP C18这款色谱柱，进样杂质E和F，发现它们都能有明显的保留，但是杂质F峰型非常差（如图1），为后面的定量带来风险。因此我们暂时舍弃这个方案。

图3 使用氨水体系考察杂质E和F的保留情况

2. 使用酸性条件，加入离液剂（可以参考：RP-HPLC中的离液剂：原理与应用）以增强这两个碱性化合物的保留。发现在离液剂（六氟磷酸钾）的参与下，杂质E和F都可以获得明显的保留，峰型也很不错（如图4）。这是一个很不错的开始！为这个另辟蹊径的方法开发带来了希望的曙光。

图4 使用离液剂考察杂质E和F的保留情况

在使用该色谱条件进样混标溶液时，发现存在杂质与杂质，以及杂质与主成分的分离度问题。因此我们在该条件下，考察多款选择性互补的色谱柱，结果如图5：

图5 考察多款选择性互补的色谱柱

结果显示，在Horizon C18/PFP上，各成分体现出更好的分离度，因此我们尝试在该色谱下进行梯度方法、柱温等因素的优化，最终成功实现了各组分的分离，该方法在不同批次色谱柱下均可以重现，方法稳定性好。

因此，我们通过重新设计流动相以及选择色谱柱，成功为昂丹司琼有关物质的检测另辟蹊径，方法稳定可靠，可以供各位用户参考。当然，除了这个方法，也可以在体系中加入离子对试剂（如烷基磺酸钠类），来解决杂质E和F的保留问题，我们本案例并未尝试这个方向，如果后面有用到这种策略再分享给大家。

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